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多酚氧化酶檢測(cè)試劑盒(PPO)說明書可見分光光度法
更新時(shí)間:2020-03-13 點(diǎn)擊量:3266

多酚氧化酶檢測(cè)試劑盒(PPO)說明書

可見分光光度法

貨號(hào):YJS2203                                         規(guī)格:50管/24樣

產(chǎn)品簡介:

PPO主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰蒸餾水

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體,60ml×1瓶,4保存;

試劑一:液體,40ml×1瓶,4保存;

試劑二:液體,10ml×1瓶,4保存;

試劑三:液體,20ml×1瓶,4保存

操作步驟:

  • 粗酶液提取:   

1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μl提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次)8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

2、稱取約0.2g組織,加入1ml提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表:

試劑名稱(μl

測(cè)定管

對(duì)照管

試劑一

600

600

試劑二

150

150

樣本

150

 

煮沸的樣本

 

150

37(哺乳動(dòng)物)25(其它物種)中準(zhǔn)確水浴10min后,迅速放入冰浴中冷卻

試劑三

300

300

充分混勻,5000g,常溫離心10min,收集上清,用蒸餾水調(diào)零,525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度。

注意:每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行1min沸水浴處理

PPO計(jì)算:

1、血清、血漿或果汁PPO活性計(jì)算

單位定義:每分鐘每毫升樣品在每毫升反應(yīng)體系中使525nm吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位

PPO(U/mL=(A測(cè)定-A對(duì)照)×反應(yīng)總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應(yīng)時(shí)間

=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷V液*

2、組織中PPO活力的計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/mg prot)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷蛋白濃度(mg/ml)=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷蛋白濃度(mg/ml

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/g 鮮重)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷樣本鮮重(g/ml=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷樣本鮮重(g/ml

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/104 cell)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104/ml=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷500*

 

*V液:加入的血清、血漿或果汁的體積

*V樣:加入樣本體積

*V樣總:加入提取液體積

*500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)500萬

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染代做報(bào)價(jià)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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