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ELISA法
更新時間:2011-07-29 點擊量:1440

光度酶聯(lián)免疫分析常被稱為ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附分析。它zui早由EngvallPerlmannVan WeemanSchuurs同時建立,并用于醫(yī)學(xué)研究。它利用酶標(biāo)記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合,既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性,又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性,因而極大地提高了靈敏度。同時它又是一種非均相分析,即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程,從而除去了未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)。

ELISA是將抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)有機結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。它的基本原理是:使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;抗原或抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成美標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體即保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,使受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色產(chǎn)反應(yīng)的深淺進行定性分析或定量分析。由于酶的催化效率很高,往往一分子酶在1min內(nèi)可催化數(shù)十萬及至上千萬分子底物變?yōu)楫a(chǎn)物,故可極大地放大反應(yīng)信號,從而使測定方法達到很高的靈敏度。從以上的原理可知,整個ELISA試驗可分為三個部分:一是免疫學(xué)反應(yīng)過程,包括抗原、抗體、酶標(biāo)記物之間的反應(yīng);二是酶和底物反應(yīng)過程,可以使用不同的酶/底物系統(tǒng);三是檢測方法的建立,可以利用已經(jīng)存在的各種分析手段,對酶催化反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物進行定量分析,根據(jù)產(chǎn)物的理化性質(zhì),可采用分光光度法,也可采用熒光分析法、化學(xué)發(fā)光分析法、電化學(xué)分析法等分析方法。

 

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